Государственная фармакопея Республики Беларусь -
Скачать (прямая ссылка):
В диапазоне концентраций эндотоксина, указанном производителем лизата, абсолютное значение коэффициента корреляции, | r |, должно превышать или быть равным 0,980.
(ii) Определение мешающих факторов
Выбирают концентрацию эндотоксина в центре или недалеко от центра стандартной кривой. Готовят растворы A, B, C и D в соответствии с Таблицей
2.6.14.-4. Проводят испытание с каждым из этих растворов не менее, чем в двух повторностях в соответствии с рекомендациями производителя лизата (объем испытуемого раствора и раствора лизата, объемное соотношение испытуемого раствора и раствора лизата, время инкубации и т.д.).
Таблица 2.6.14.-4
Раствор Концентрация эндоток Раствор, к которому Число повторно
сина добавляют эндоток стей
син
А Отсутствует Испытуемый раствор Не менее 2
В Средняя концентрация Испытуемый раствор Не менее 2
стандартной кривой
С Не менее трех концентра Вода для ИБЭ Не менее 2
ций (низшая определяется
А)
D Отсутствует Вода для ИБЭ Не менее 2
Раствор А - испытуемый раствор, который может быть разбавлен без превышения
МДР,
Раствор В - испытуемый препарат в разбавлении, аналогичном раствору А, содер
жащий добавленный эндотоксин в концентрации, соответствующей или близкой к
центру стандартной кривой,
Раствор С - стандартный раствор эндотоксина в концентрациях, использовавшихся
при валидации метода в соответствии с указаниями подраздела «3. Предваритель
ные испытания. (i) Подтверждение выполнения критериев стандартной кривой» (по
ложительные контроли),
Раствор D - вода для ИБЭ (отрицательный контроль)
Вычисляют среднее значение возврата эндотоксина вычитанием средней концентрации эндотоксина в растворе (при ее наличии) из средней концентрации эндотоксина в растворе, содержащем добавленный эндотоксин.
Считают, что испытуемый раствор не содержит мешающих факторов, если в условиях испытания вычисленная концентрация эндотоксина, добавленного к испытуемому раствору, находится в пределах 50-200% от известной концентрации добавленного эндотоксина, после вычитания концентрации эндотоксина, обнаруженной в растворе, не содержащем добавок стандарта.
Если возврат эндотоксина не попадает в указанные пределы, следует провести операцию исключения мешающих факторов в соответствии с указаниями, приведенными при описании принципа гелевого сгустка, подраздел «1. Предварительные испытания. (ii) Определение мешающих факторов». Эффективность об-
работки подтверждают повторным проведением испытания на мешающие факторы.
4. ИСПЫТАНИЕ
(i) Метод
Следуют указаниям, приведенным в подразделе «3. Предварительные испытания. (ii) Определение мешающих факторов».
(ii) Вычисления
Для раствора А в каждой повторности определяют концентрацию эндотоксина с использованием стандартной кривой, полученной из ряда положительных контролей, раствор С.
Результаты испытания считают достоверными при выполнении следующих трех условий:
(а) результат, полученный для раствора D (отрицательный контроль), не превышает предельное холостое значение, требуемое в описании используемого лизата,
(б) результаты, полученные для растворов С (положительные контроли) соответствуют требованиям валидации, приведенным в подразделе «1. Предварительные испытания. (i) Подтверждение выполнения критериев стандартной кривой»,
(с) возврат эндотоксина, вычисленный из концентрации эндотоксина, определенной в растворе В, после вычитания концентрации эндотоксина, определенной в растворе А, находится в пределах 50-200%.
(iii) Интерпретация
Испытуемый препарат соответствует требованиям испытания, если средняя концентрация эндотоксина в повторностях раствора А, с учетом разведений и концентрации, менее предельного значения эндотоксина для препарата.
5. РЕАГЕНТЫ
(i) Раствор лизата
Лизат амебоцитов растворяют путем осторожного перемешивания в воде для ИБЭ или в буфере, в соответствии с рекомендациями производителя лизата. Восстановленный лизат хранят в охлажденном или замороженном состоянии, в соответствии с указаниями производителя.
(ii) Лизат амебоцитов
Лизат амебоцитов - лиофилизированный продукт, полученный из амебо-цитного лизата мечехвоста (Limulus polyphemus или Tachypleus tridentatus). Этот реагент может производиться только в соответствии с предписаниями компетентных органов.
